质谱法是一种在医学和农业中广泛应用的优良蛋白质分析方法，但它需要复杂且耗时的样品制备。在这项研究中，我们开发了一种使用阴离子交换固相萃取离心柱显着缩短制备时间的新方法，该离心柱可以由现成的材料制成。这种新的和可靠的方法不需要高度专业化的实验室技术，并且可以从痕量细胞和组织样本中进行可重现的质谱分析。

近年来，蛋白质组学研究利用质量光谱法全面研究生物样品的蛋白质成分已变得非常流行。为了通过质谱法检测蛋白质，需要提取细胞中所含的蛋白质成分，并用蛋白酶将其消化至易于质谱分析的肽大小。以这种方式消化蛋白质通常需要 20 小时或更长时间的长反应时间。十二烷基硫酸钠 (SDS) 是一种常用于蛋白质提取过程的表面活性剂，它会干扰质谱分析和蛋白质消化，必须在分析前彻底去除。但是，该过程会带来成本，即样本丢失。为了克服这些挑战，我们开发了一种创新的样品制备方法 AnExSP(阴离子交换盘辅助连续样品制备)，

通过富集磁盘表面的蛋白质成分，我们成功地在至少 60 分钟内完成了酶消化过程。此外，我们建立了从盘上仅洗脱消化肽的最佳条件，同时保持盘上样品中所含的 SDS，实现了操作简单、损失最小的样品预处理。通过将 AnExSP 与 Orbitrap质谱法的数据独立采集 (DIA) 分析相结合，我们成功地在 1 微克人类培养细胞蛋白提取物中检测到大约 7,000 种不同的蛋白质成分。未来通过使用缩小尺寸的 StageTip 建立样品预处理条件，AnExSP 预处理可用于单细胞蛋白质组学研究，这在近年来引起了越来越多的关注。

AnExSP 还可用于蛋白质实验中常用的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 分离的蛋白质的预处理。与传统的预处理方法相比，AnExSP 表现出卓越的性能，尤其是在检测长链消化肽方面。在本研究中，我们将AnExSP和SDS-PAGE与蛋白质复合物的化学交联法相结合，成功实现了目标蛋白复合物的简单纯化和常规方法难以检测的长链交联肽的高效检测。 . 由于其广泛的通用性，AnExSP 有望应用于微量蛋白的高灵敏度结构分析方法生物样品中的复合物。